Qué es HPLC y cómo se lee un cromatograma
La HPLC (cromatografía líquida de alta resolución, del inglés High-Performance Liquid Chromatography) hace que cada componente de una muestra salga de la columna en su propio tiempo, y con eso estima la pureza cromatográfica de un péptido bajo un método definido. Es la prueba detrás del número de pureza del COA. Aquí te explicamos cómo funciona y cómo leer su resultado.
Así se ve la pureza: el cromatograma
La HPLC produce un cromatograma: un gráfico de las señales que el método separa y registra. Bajo condiciones y controles adecuados, la señal integrada asociada al compuesto objetivo suele ser la principal; las demás corresponden a otros componentes detectados. La pureza cromatográfica compara su área con el área total considerada por el método. LC-HRMS contrasta la identidad molecular.
De la muestra al pico
La idea es sencilla: si los componentes de una mezcla salen a tiempos distintos, se pueden contar por separado. Eso es lo que hace la HPLC.
La muestra entra a la columna
El péptido disuelto se inyecta y un líquido (la fase móvil) lo arrastra a presión a través de una columna rellena.
Los componentes se separan
En fase reversa la columna es apolar —cadenas C18 sobre sílice— y el disolvente arranca acuoso. Lo polar sale primero; lo apolar se queda pegado hasta que sube la proporción de acetonitrilo. Ese ascenso programado es el gradiente, y su pendiente decide cuánto se separan dos señales parecidas: un gradiente rápido termina antes y superpone impurezas que uno lento habría resuelto. Por eso una pureza sin su gradiente no se puede comparar con otra.
El detector los registra
A la salida, un detector UV mide cuánta luz absorbe lo que pasa, y la longitud de onda decide qué ve. A 214 nm absorbe el enlace peptídico, así que responden todos los residuos por igual. A 280 nm sólo responden triptófano, tirosina y fenilalanina: un péptido sin aromáticos apenas aparece, y cualquier impureza que sí los tenga se ve enorme en comparación. Una pureza leída a 280 nm y otra a 214 nm no describen lo mismo aunque den el mismo número.
Qué significa «≥99%»
Una pureza por HPLC de ≥99% significa que al menos el 99% del área integrada considerada por el método corresponde a la señal principal. El resultado depende del método y del detector. LC-HRMS contrasta la identidad molecular y una determinación cuantitativa específica establece la fracción másica absoluta.
HPLC en el COA de BioPeptidos
La línea de «Pureza (HPLC)» del COA procede de esta prueba. En BioPeptidos, cada lote se analiza por HPLC, con objetivo de pureza ≥99% y resultado registrado en el COA. El laboratorio independiente y el marco ISO/IEC 17025 documentan método, competencia técnica y trazabilidad.
Péptidos verificados por HPLC
Todo el catálogo se analiza por HPLC (objetivo ≥99%), con su COA por lote.
Dudas frecuentes
¿Qué es la HPLC?
La HPLC, o cromatografía líquida de alta resolución, hace pasar la muestra por una columna que separa sus componentes, y un detector registra la señal de cada uno. En péptidos se usa para estimar la pureza cromatográfica bajo un método definido.
¿Cómo mide la HPLC la pureza?
El método integra la señal asociada al compuesto objetivo y la compara con el área total considerada. El porcentaje describe pureza cromatográfica bajo esas condiciones; no confirma por sí solo la identidad ni una fracción másica absoluta.
¿Qué significa una pureza ≥99% por HPLC?
Significa que al menos 99% del área integrada considerada por el método corresponde a la señal principal. El resultado depende del método y del detector; debe leerse junto con la identidad por LC-HRMS y el COA del lote.
¿Qué es un cromatograma?
Es el gráfico que produce la HPLC: el eje horizontal representa el tiempo de retención y el vertical la respuesta del detector. Cada pico es una señal separada; asignar la principal al compuesto objetivo requiere un método y controles adecuados.
¿Los péptidos de BioPeptidos se analizan por HPLC?
Sí. Cada lote se analiza por HPLC, con un objetivo de pureza cromatográfica ≥99%, y el resultado queda registrado en el COA.