Perfil
Área relativa de la señal principal bajo condiciones declaradas.
Identidad de péptidos por LC-HRMS y LC-MS/MS.
LC-HRMS mide la masa exacta del compuesto y la compara con la calculada; el mapeo peptídico por LC-MS/MS fragmenta el péptido y aporta información de su secuencia. Los COA de BioPeptidos reportan las dos.
Pureza cromatográfica e identidad molecular.
HPLC separa las señales detectadas y cuantifica el área relativa de la señal principal, pero no dice qué molécula es esa señal. LC-HRMS separa la muestra por cromatografía líquida y mide su masa con alta resolución, para compararla con la masa calculada de la secuencia declarada.
Cómo se mide la masa de un péptido.
En péptidos, la espectrometría de masas suele ionizar la muestra por electrospray, que convierte las moléculas en iones sin destruirlas. El electrospray no produce un ion por molécula sino una familia de iones multicargados [M+nH]ⁿ⁺: un péptido de 4731 Da queda fuera del rango útil de muchos analizadores con una sola carga, y con cuatro o cinco protones cae dentro sin dificultad. El software recompone la masa neutra a partir de esa envolvente de cargas, y esa reconstrucción es la que se contrasta con la masa teórica.
La alta resolución distingue diferencias pequeñas de masa. Una desviación puede apuntar a truncamiento, modificación no esperada, aducto o material relacionado.
Qué añade el mapeo peptídico.
LC-MS/MS selecciona iones del péptido y los fragmenta; los fragmentos se comparan con los esperados para la secuencia declarada. Así aparecen diferencias que la masa intacta no ve, como dos residuos cambiados de lugar.
Qué no resuelve ninguna de las dos.
El límite es geométrico, no instrumental: la masa no distingue isómeros. Una racemización de L a D no cambia un solo dalton, y leucina e isoleucina pesan lo mismo, 113.084 Da. Por eso HPLC y espectrometría de masas no son redundantes: la cromatografía separa lo que la masa no puede distinguir, y la masa identifica lo que la cromatografía sólo puede contar.
Masa exacta
Masa observada frente a la calculada para la entidad declarada.
Secuencia
Fragmentos comparados con los esperados para la secuencia.
En los certificados de BioPeptidos.
Cada COA de péptido registra la identidad como «conforme con el estándar de referencia» por masa exacta (LC-HRMS) y mapeo peptídico (LC-MS/MS), junto a la pureza por HPLC, los agregados, el agua, las endotoxinas y la esterilidad. En moléculas que no son péptidos, como NAD+ o 5-Amino-1MQ, lo que aporta la identidad es la masa exacta. La página de calidad describe su relación con la síntesis SPPS/Fmoc, las endotoxinas e ISO/IEC 17025, y la guía del COA por lote explica cómo leer cada campo.
Masas que no se intercambian.
Retatrutide no se evalúa con la misma masa esperada que GHK-Cu, Tirzepatida no pesa lo mismo que Semax y MOTS-c tiene otra composición. En GHK-Cu, además, el cobre forma parte de la especie declarada. Cada entidad se contrasta con su referencia, no con una etiqueta genérica.
Preguntas frecuentes.
¿LC-HRMS es lo mismo que MS/MS?
No. LC-HRMS mide con alta resolución la masa del ion intacto; MS/MS selecciona iones y los fragmenta para obtener información de la secuencia.
¿La masa exacta demuestra la secuencia del péptido?
Sola no: dos péptidos con los mismos residuos en otro orden pesan igual. El mapeo peptídico por LC-MS/MS aporta esa información; ni así se distinguen leucina e isoleucina ni los isómeros D y L.
¿El análisis convierte el producto en clínico?
No. Es un análisis del material de investigación y no establece ningún uso clínico.
Pureza, masa y lote.
HPLC para la pureza, LC-HRMS y LC-MS/MS para la identidad, y el COA para la trazabilidad.